Análisis de organismos modificados genéticamente en alimentos mediante el uso combinado de reacción en cadena de la polimerasa y electroforesis capilar
Author
García Cañas, VirginiaEntity
UAM. Departamento de Química Física AplicadaDate
2004-10-01Subjects
Alimentos transgénicos - Tesis; ADN polimerasas - Genética - Tesis doctorales; Electroforesis capilar - Genética - Tesis doctorales; QuímicaNote
Tesis Doctoral inédita leída en la Universidad Autónoma de Madrid, Facultad de Ciencias, Departamento de ciencia y tecnología de los alimentos e ingeniería química. Fecha de lectura: 01-10-2004Abstract
Esta memoria recoge los resultados más relevantes obtenidos de la
aplicación de la electroforesis capilar al análisis de secuencias de DNA
específicas amplificadas por la reacción en cadena de la polimerasa
(PCR), para llevar a cabo la detección de organismos modiicados
genéticamente (OMGs) en alimentos. Para ello, se han desarrollado tres
procedimientos de análisis novedosos que permiten la detección
sensible, la cuantiticación y la detección múltiple de OMGs en
alimentos.
La primera parte de la memoria presenta la puesta a punto de un
método sensible de detección de maíz transgénico Bt Event 176 en
harina de maíz. El método se basa en la amplificación de secuencias de
DNA transgénico y DNA genómico de maíz por PCR a partir de extractos
puriñcados de maíz, y en su posterior análisis mediante CGE y
detección por fluorescencia inducida por láser (LIF). La utilización de
CGE-LIF para llevar a cabo el análisis de los productos de PCR
proporciona una elevada sensibilidad y eficacia, elementos que son de
gran importancia en la discriminación de falsos negativos y positivos.
Además, demuestra una exactitud aceptable en el cálculo del tamaiío de
los fragmentos de DNA estudiados y una reproducibilidad buena, de
modo que el método podría ser aplicado para la detección de maíz
transgénico a niveles inferiores a los fijados por la Unión Europea para
el correspondiente etiquetado de los alimentos transgénicos.
La segunda parte de la memoria detalla el diseño y puesta a punto
de un procedimiento analítico para la determinación cuantitativa de
maíz transgénico Bt Event 176 en alimentos. Dicho procedimiento
consiste en el empleo de sistemas de PCR competitiva cuantitativa (QCPCR)
y el análisis de los productos de PCR mediante CGE-LIF. Durante
Resumen
el desarrollo de la mencionada metodología también se discuten
algunos aspectos acerca del diseño, la constmcción y calibración de los
estándares internos de DNA necesarios en QC-PCR, así como las
condiciones de amplificación y cuantificación
La úitima parte de la memoria recoge la aplicación del método
CGE-LIF como herramienta de análisis en la optimización de sistemas
de amplificación simultánea de seis secuencias de DNA e ~ p e ~ cpaors
PCR-multiplex. También se demuestran las ventajas que presenta el
método CGE-LIF frente a las técnicas electroforéticas convencionales en
términos de sensibilidad y resolución aplicado a la detección simultánea
de cinco variedades transgénicas de maíz (Btll, T25, MON810, GA21 y
Bt Event 176). El método CGE-LiF proporciona además buena
reproducibiidad en los resultados, de manera que puede ser aplicado
para la detección de las cinco variedades mencionadas de maíz
transgénico.
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