Cuantificación del quimerismo hematopéyico en pacientes con leucemias sometidos a trasplante alogénico de médula ósea
Author
Buño Borde, IsmaelEntity
UAM. Departamento de BiologíaDate
1997-04-14Subjects
Leucemia - Tratamiento - Tesis doctorales; Médula ósea - Trasplante - Tesis doctorales; Biología y Biomedicina / BiologíaNote
Tesis doctoral inédita leída en la Universidad Autónoma de Madrid, Facultad de Ciencias, Departamento de Biología. Fecha de lectura: 14-04-1997Abstract
El presente trabajo se ha centrado en la búsqueda de polimorfismos, revelados mediante la digestión
in situ con enzimas de restricción, que permitieran la diferenciación de células de donante y receptor
en un trasplante de médula ósea con el fin de cuantificar el quimerismo hemopoyético en el paciente
trasplantado. En concreto, tras digestión in situ con el enzima de restricción Sau3A se obtiene un
patrón de bandas en el que únicamente se reconocen sin digerir las regiones pericentroméricas de los
cromosomas 3 y 9. Además, dicho enzima de restricción pone de manifiesto un polimorfismo en la
heterocromatina constitutiva del cromosoma 3, dando lugar a tres posibles cariotipos: 3 ++ y 3--.
El reducido número de regiones resistentes a la digestión hace posible que el polimorfismo pueda ser
identificado no sólo en células en metafase, sino también en núcleos interfásicos. La digestión in situ
con Sau3A, por tanto, se ha mostrado muy útil para cuantificar el quimerismo en aquellos pacientes
trasplantados que mostraban un patrón de digestión del cromosoma 3 distinto al de sus donantes (25%
de los casos según la muestra de 24 pacientes analizada). Asimismo, permite el estudio cuantitativo
del quimerismo en los casos en que donante y receptor son del mismo sexo y no se dispone, por tanto,
de los cromosomas sexuales como marcadores para identificar el origen de cada célula en la médula
ósea del paciente trasplantado.
Paralelamente se ha caracterizado el polimorfismo revelado en la heterocromatina pericentromérica
del cromosoma 3 desde un punto de vista citogenético y molecular, evaluando la participación de
distintas familias de ADN satélite. Para ello se han llevado a cabo experimentos de hibridación in situ
fluorescente utilizando como sonda diferentes familias de secuencias. incluidos los ADN satélites que
ocupan la región pericentromérica del cromosoma 3 (alfoide y satélite 1), sobre cromosomas control
y previamente digeridos con Sau3A. Asimismo se han caracterizado, desde un punto de vista
molecular, las fracciones de ADN solubilizado y no solubilizado por la acción in situ de Sau3A.
Mediante estas dos aproximaciones metodológicas, se ha podido determinar que el satélite alfa de
dicho cromosoma se digiere intensamente en todos los casos (3 + y 3 - ). El satélite 1, por el contrario,
no se digiere en ningún caso, y presenta, además, un polimorfismo de tamaño que puede explicar los
resultados obtenidos con Sau3A. Se deduce, por tanto, que Sau3A pone de manifiesto un polimorfismo
de tamaño del satélite 1 del cromosoma 3 y no un polimorfismo de presencia/ausencia o de ADN
digerido/resistente, en el que se reconocerían como 3- los cromosomas con escasa cantidad de satélite
1 y como 3' aquellos en los que dicho satélite se encuentra ampliamente representado.
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Description
Texto de la Tesis Doctoral
Google Scholar:Buño Borde, Ismael
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