Fosforilación de la conexina-32 por el receptor del factor de crecimiento epidérmico

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dc.contributor.advisor Villalobo Polo, Juan Antonio (dir.) es
dc.contributor.author Díez Iriondo, Juan Antonio es
dc.contributor.other UAM. Departamento de Bioquímica es_ES
dc.contributor.other Instituto de Investigaciones Biomédicas (C.S.I.C.) es
dc.date.accessioned 2015-04-08T14:43:53Z
dc.date.available 2015-04-08T14:43:53Z
dc.date.issued 1994-11-04
dc.identifier.uri http://hdl.handle.net/10486/664933 en
dc.description Tesis doctoral inédita leída en la Universidad Autónoma de Madrid, Facultad de Medicina, Departamento de Bioquímica. Fecha de lectura: 4-11-1994 es_ES
dc.description.abstract En este trabajo se han aislado uniones comunicantes a partir de membranas plasmáticas de higado de rata, se ha determinado su grado de pureza y se ha analizado su organización estructural en placas. Estas uniones comunicantes purificadas se reconstituyeron en liposornas, y la permeabilidad a través del canal que forman se analizó mediante la difusión de ascorbato hasta el lumen de los liposomas y reducción del citocromo c encapsulado en el interior de los mismos. La permeabilidad a través de los canales de las uniones comunicantes resultó ser dependiente de la temperatura, mostrando la representación de Arrhenius correspondiente al proceso una recta bifásica, a partir de la cual se calcularon una temperatura de transición de 28,2° C y unas energias de activación, por encima y por debajo de esta temperatura, de 28,8 kj/mol (6,9 kcal/mol) y 15, 6 kJ/mol (3,7 kcal/mol); respectivamente, propias de un proceso de difusión pasiva. Se ha caracterizado también en este traba jo la fosforilación de la conexina-32, principal componente de las uniones comunicantes de hígado de rata, por la proteína quinasa A y la proteína quinasa C. Además, hemos encontrado que esta conexina se fosforila por una fracción enriquecida en el receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGF), purificada mediante cromatografía de afinidad de calmodulina-agarosa a partir de membranas plasmáticas previamente solubilizadas. Esta fosforilación tiene lugar en residuos de tirosina, seriña y treonina. La fosforilación de la conexina-32 en residuos de tirosina fue estimulada por el EGF, sugiriendo que el receptor del EGF cataliza dicho proceso. La m-calpaína hidroliza la conexina-32 en su extremo carboxilo dando un fragmento mayor de 26 kDa que contiene el (los) sitio(s) de fosforilación por el receptor del EGF. Asimismo, hemos demostrado que la calmodulina inhibe la fosforilación en tirosina de la conexina-32 independientemente de la presencia de calcio. La coñexina-26 no se fosforila por la fracción enriquecida en el receptor del EGF, mientras que la conexina-32 de hígado de ratón se fosforila por dicha preparación pero de un modo no estimulable por el EGF. es_ES
dc.description.abstract We have purified gap junctions from rat liver plasma membranes and assessed their degree of purity and their structural organization ínto membrane plaques. The purified gap junctions were reconstituted into liposomes, and channel conductance was analyzed on the basis of the difussion of ascorbate into their lumen and subsequent reduction of intraliposomal cytochrome c, which was monitored spectrophotometrically. Permeability through the channel was found to be a temperature dependent process. A transition temperature of 28,2° C and activation energies of 28,8 kJ/mol {6,9 kcal/mol) and 15,6 kj/mol (3,7 kcal/mol) above and below that temperature, respectively, were calculated from the corresponding Arrhenius plot. These activation energies are typical of passive difussion processes. We have also characterized'the phosphorylation of connexin-32, the main component of rat liver gap junctions, by protein kinase A and protein kinase C. Also, we have found that this connexin is phosphorylated by an epidermal growth factor {EGF) receptor-enriched fraction, purified from solubilized rat liver plasma membranes by calmodulin affinity chromatography. Phosphorylation of connexin-32 by the EGF receptor preparation occurred in tyrosine, serine and threonine residues. Tyrosine phosphorylation takes place in an EGF-stimulated manner. m-Calpain hydrolizes phosphorylated rat liver connexin-32 in its carboxyl-terminal tail, producing a major 26 kDa fragment which contains the phosphorylation site(s) by the EGF receptor. Also, calmodulin inhibits connexin-32 tyrosine phosphorylation in a calcium-independent manner. In contrast, connexin-2 6 from mouse liver gap junctions was not phosphorylated by the EGF receptor enriched fraction, whereas mouse connexin-32 was phosphorylated by this fraction but not in an EGFstimulated manner. en
dc.format.extent 148 pag. es_ES
dc.format.mimetype application/pdf en
dc.language.iso spa en
dc.subject.other Proteínas quinasas-Tesis doctorales es_ES
dc.subject.other Fosforilación-Tesis doctorales es_ES
dc.subject.other Factor de crecimiento epidérmico-Tesis doctorales es_ES
dc.subject.other Proteina-tirosina quinasa-Tesis doctorales es_ES
dc.title Fosforilación de la conexina-32 por el receptor del factor de crecimiento epidérmico es_ES
dc.type doctoralThesis en
dc.subject.eciencia Biología y Biomedicina / Biología es_ES
dc.rights.accessRights closedAccess en


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