Estructura y expresión del gen de la ATPasa de calcio de retículo sarco/endoplásmico de "artemia franciscana"

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dc.contributor.advisor Sastre Garzón, Leandro (dir.) es
dc.contributor.author Escalante Hernánez, Ricardo es
dc.contributor.other UAM. Departamento de Bioquímica es_ES
dc.date.accessioned 2015-04-15T08:49:35Z
dc.date.available 2015-04-15T08:49:35Z
dc.date.issued 1994-11-10
dc.identifier.uri http://hdl.handle.net/10486/665094 en
dc.description Tesis doctoral inédita leída en la Universidad Autónoma de Madrid, Facultad de Medicina, Departamento de Bioquímica. Fecha de lectura: 10-11-1994 es_ES
dc.description.abstract Lac ATPasas de calcio de retículo sarco/endoplásmico (Sarco/Endoplasmic Reticulum Ca- ATPase, SERCA) son enzimas integrales de membrana implicadas en el transporte de calcio desde el citoplasma al retículo sarcoplásmico de las células musculares o al endoplásmico de las no musculares. Estas enzimas acoplan la hidrólisis de ATP al transporte de los iones a través de la membrana mediante la formación de un intermediario fosforiiado. El estudio de este gen en el crustáceo Artemia ha sido el objeto de esta tesis, que se enmarca en un proyecto más amplio centrado en el estudio de la regulación de la expresión génica durante el desarrollo de este organismo. Por otro lado, los resultados obtenidos han permitido también comparar aspectos de la estructura de este gen con los de otras especies alejadas evolutivamente. El gen de la ATPasa de calcio de retículo sarco/endoplásmico en Artemia es un gen único que abarca una región de 65 kb y está dividido en 18 exones. La posición de 12 de los intrones está conservada con respecto al gen SERCA 1 de vertebrados. El gen de Artemia presenta la característica de poseer dos promotores alternativos asociados a un primer exón que es diferente para cada uno de ellos. El codon de iniciación se encuentra en el segundo exón del gen y, por lo tanto, la secuencia de la proteína no se ve afectada por el uso de uno u otro promotor. Existe también la posibilidad de un procesamiento alternativo en la región 3' del transcrito primario basado enla utiiación, o no, de un sitio donador interno situado en el penúltimo exón Si este sitio de procesamiento se utiliza, el exón 17 queda unido al 18 para dar lugar al RNA mensajero de 4.5 kb. Si dicho sitio no se reconoce, el exón 18 queda excluido del RNA mensajero, que en este caso es el de 5.2 kb. La traducción de estos mensajeros da lugar a dos isoformas que se diferencian en la región C-terminal, donde los últimos 6 aminoácidos de la isoforma codificada por el mensajero de menor tamaño son sustituidos por 30 aminoácidos diferentes en la isoforma codificada por el mensajero de mayor tamaño, Este procesamiento alternativo es similar al descrito para el gen SERCA 2 de vertebrados. Cada una de estas isoformas presenta diferente especificidad de expresión tisular, expresándose el mRNA de 4.5 kb en músculo y el de 5.2 kb en la totalidad de los tejidos de la larva. Los dos mRNAs muestran también diferente patrón temporal de expresión durante el desarrollo de Arfemia. En concordancia con estos datos, experimentos de hibridación han demostrado que cada una de las isoformas se transcribe desde uno de los promotores alternativos mencionados anteriormente. La caracterización del patrón temporal y espacial de expresión de los dos mRNAs, junto al clonaje y secuenciación de las respectivas regiones promotoras permitirán futuros estudios sobre los mecanismos de regulación de la expresión de este gen. es_ES
dc.description.abstract The carca/ endoplasmic reticulum Ca-ATPases (SERCA) are transmembrane enzymes involved in calcium transport form the cytosol to the sarcoplasmic reticulum of muscle cells or to the endoplasmic reticulum of non-muscle cells. These enzymes couple ATP hydrolysis to ion , translocation acrocs the membrane through the formation of a phosphoqlated intermediary state. The study of this gene in the crustacean Artemia has been the aim of this Thesis. This project is part of a broader one centered on the study of the regulation of gene expression' during the development of this organism The results obtained have also allowed to compare the structure of this gene in Artemia with that of vertebrate genes. Artemia has a unique saco/ endoplasmic reticulum Ca-ATPase gene that is 65 kb long and is divided uito 18 exons. The position of 12 of the introns is conserved in relation to vertebrate SERCA 1 gene. The Arfemia gene is transcribed from two alternative promoters associated with different first exons of the gene. Independently of which of the promoters is used, the amino acid sequence of the protein is the same since the translation initiation codon is placed on the second exon of the gene. The 3' end of the gene can also be processed in two different ways, depending on the recognition of an interna1 splicing donor site located on the penultimate exon. If this splicing site is recognized, part of exon 17 is joined to exon 18 to generate a 4.5 kb rnRNA. If the donor cite is not recognized, exon 18 is excluded and a 5.2 kb mRNA is generated. The two mRNAs code for protein isoforms that differ at their C-terminal arnino aads; the last 6 arnino aads of the 4.5 kb mRNA coded icoform are changed for 30 different amino acids in the 5.2 kb mRNA coded isoform. The alternative processing of the 3' end of the gene is similar to the one described for vertebrate SERCA 2 genes. The two protein isoforms have a different tissue-specificity of expression, the 4.5 kb mRNA is expressed on muscles and the 5.2 kb mRNA in non-muscle cells. Both mRNAs also show a different temporal pattern of expression during Artemia development. In agreement with these data, hybridization experirnents have shown that each of the two mRNAs is transcribed from one of the h o alternative promoters described above. The characterization of the spatial and temporal patterns of expression of the two mRNAs, together with the cloning and sequencing of the two alternative promoters of the gene, make possible future studies on the mechanisms that regulate the expression of this gene during Artemia development. en
dc.format.extent 97 pag. es_ES
dc.format.mimetype application/pdf en
dc.language.iso spa en
dc.subject.other Adenosina-trifosfatasa-Tesis doctorales es_ES
dc.subject.other Artemia-Genética-Tesis doctorales es_ES
dc.title Estructura y expresión del gen de la ATPasa de calcio de retículo sarco/endoplásmico de "artemia franciscana" es_ES
dc.type doctoralThesis en
dc.subject.eciencia Biología y Biomedicina / Biología es_ES
dc.rights.accessRights closedAccess en


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