Apoptosis y criopreservación de progenitores hematopoyéticos de sangre periférica
Author
García Grande, AránzazuAdvisor
Hernández Navarro, FernandoEntity
UAM. Departamento de Bioquímica; Hospital Universitario La PazDate
2002-06-27Subjects
Sangre-Tesis doctorales; Apoptosis-Tesis doctorales; Biología y Biomedicina / BiologíaNote
Tesis Doctoral inédita leída en la Universidad Autónoma de Madrid, Facultad de Ciencias, Departamento de Bioquímica. Fecha de lectura: 27-06-2002Abstract
La cantidad de células CD34+ infundidas constituye un parámetro de gran valor
para asegurar el 6xito del implante del producto de células progenitoras
hematopoy6ticas trasplantado. Su cuanticación por citometría de flujo es
considerado hoy el método de elección aceptado para la determinación de PHSP.
Este trabajo propone el desarrollo de una técnica citom6tnca nueva que incluye
todas las premisas conocidas para la cuantificación de cblulas CD34+ en
muestras de leucoaféresis y que permite conocer además, su viabilidad mediante
identikación y cuantiiición de las dlulas CD34+ apoptóticas y necróticas. Para
comprobar la validez del método propuesto, las determinaciones se realizaron en
comparación con dos métodos ya estandarizados, y en dos momentos diferentes:
antes de la congelación y tras la descongelación de los progenitores
hematopoybticos. Además, se estudia el efecto de la criopresewación sobre las
células mediante la incorporación del marcador de detección de apoptosis precoz
Anexina V.
Los resultados obtenidos indican que con nuestro mbtodo es mayor la población
de progenitores que se obtiene tanto en la precongelación como tras la
descongelación. Ello es debido a la aplicación del sistema de ventanas
consecutivas, la utilización de fluoroesferas que permite la cuanticación de la
concentración celular, y a la utilización de fluoroar>mos que ofrecen marcaje más
específico y mayor avidez por el antígeno CD34. En cuanto al estudio del efecto
de la criopresewación se detecta disminución de la concentración de
progenitores tras la descongelación. Estas variaciones sin embargo, no parecen
estar relacionadas con p6rdida selectiva de células sino con la disminución en la
inmunorreactividad por alteración del antígeno CD34.
Finalmente, el estudio de otros factores como la utilización de determinada
quimioterapia en el tratamiento previo, el uso de quimioterapia en la movilización
de los progenitores y el número de aféresis consecutivas, sí parecen influir en
alguna medida sobre la viabilidad de las células hematopoybticas CD34+.
Por todo ello, se considera que la aplicación de esta metodologia es de gran
interés clínico y que su estandarización puede conducir a obtener un producto
mejor para su utilización en el trasplante. The amount of CD34+ cells infused is considered the best parameter for
predicting the success of engraftment after hematopoietic progenitors cell
transplantation. Nowadays, the flow cytometric assays are widely accepted for
quantication of CD34+ cells. This work propose the development of a new
cytometric technique that, including al1 the premises for the quatiication of
CD34+ cells in leucaphereais sampies, permit to know it viabili by the detection
and quanüficatii of CD34+ apoptotics and necrotics cells.
To verify the validity of the proposed method, the determination of the progenitors
cells was performed in cornparation with two standarized methods and at two
dirent times: at the end uf harvesting before aiopreservation and after thawing.
Furthemiore was studi the criopreservatim efiects on the cells by staining with
apoptosis marker Anexina V.
The results indicate that our method, the mean percentage of CD34+ cells
obtained is bigger than other methods for two moments analysed. This is due to
the application of the consewtive window, Boolean system. the use of
fluorospheres, singleplafform assays that pernil kmm cell concentration. and the
use of fluorocnmies that ofíers a markers more specific and b i i r a v a i for the
CD34 antigen.
According to the study of the aiopreservation effects, is detected a decrease of
the concentration of progenitors after thawing. These variations however do not
seem to be related with the selective ieakage of cells but with readivity immune
decrease by the alterati of CD34 entigen.
Finally, the study of other factors like the use of a specifi quirniotherapy in the
previous treatment, the mobilization regimen and the number of consecutive
apheresis, appears to affed on the viabili of CD34+ hematopoietim cells.
For al1 of this, is considered that the application of this methodology is of a great
dinic intmst and that it standardisation can drive to have a better product to use
in transplant.
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