El factor de crecimiento de tejido conectivo: Modulador redox y citoquina proinflamatoria implicada en la génesis del daño vascular

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dc.contributor.advisor Ruiz Ortega, Marta (dir.)
dc.contributor.advisor Egido de los Ríos, Jesús (dir.)
dc.contributor.author Rodrigues Díez, Raúl
dc.contributor.other UAM. Departamento de Bioquímica es_ES
dc.contributor.other Instituto de Investigación Sanitaria Fundación Jiménez Díaz es_ES
dc.date.accessioned 2015-06-10T12:33:41Z
dc.date.available 2015-06-10T12:33:41Z
dc.date.issued 2015-05-22
dc.identifier.uri http://hdl.handle.net/10486/666690
dc.description Tesis doctoral inédita leída en la Universidad Autónoma de Madrid, Facultad de Medicina, Departamento de Bioquímica. Fecha de lectura: 22-05-2015 es_ES
dc.description.abstract El factor de crecimiento de tejido conectivo (CCN2/CTGF), es un gen de desarrollo que se encuentra rexpresado en determinadas condiciones patológicas. El gen de CCN2 codifica para una proteína matricelular compuesta por cuatro módulos, la cual puede ser degradada en diferentes fragmentos que presentan actividad biológica por sí mismos. Entre estos fragmentos, se ha descrito que el módulo IV C-terminal, denominado en este trabajo CCN2(IV), es capaz de regular varias funciones celulares. Tradicionalmente, CCN2 se ha considerado como un mediador de las respuestas fibróticas inducidas por otros factores como TGF-β, Ang II, o ET-1, aunque estudios más recientes sugieren que CCN2 podría tener también un rol importante en la activación de la respuesta inflamatoria. A nivel cardiovascular, se ha descrito un aumento en la expresión tisular de CCN2 en diversas patologías, incluida la aterosclerosis o la fibrosis cardiaca, aunque sus efectos directos sobre la pared vascular no han sido investigados. En el desarrollo de las enfermedades cardiovasculares, se ha descrito la implicación de numerosos procesos moleculares y rutas de señalización, como son la respuesta inflamatoria, el aumento en la producción de ROS o la fibrosis. Como primer objetivo, se quiso determinar si en situaciones de daño vascular existía una asociación entre los niveles de CCN2 y la producción de ROS, utilizando para ello un modelo de infusión de Ang II en ratones. Una vez comprobado que en las aortas de los ratones tratados con Ang II existía un aumento en la producción de O2 .- y que este se localizaba principalmente en las mismas zonas donde se observó un aumento de CCN2, se evaluó la hipótesis de que CCN2 podría estar regulando de forma directa procesos redox a nivel vascular. Por todo esto, el principal objetivo del presente trabajo fue investigar si CCN2(IV) podía inducir, de forma directa, un aumento en la producción de ROS, para lo cual se realizaron estudios en CMLVs y CEs en cultivo, y en aorta de ratón ex vivo e in vivo. Como segundo objetivo, se investigó si CCN2(IV) regulaba la función vascular e inducía procesos inflamatorios y fibróticos. Los resultados obtenidos indicaron que CCN2(IV), tanto en células en cultivo como en aorta de ratón in vivo, producía un aumento en la producción de O2 .- y en la actividad NAD(P)H oxidasa. Además, el tratamiento con CCN2(IV) aumentó la respuesta contráctil vascular, generó disfunción endotelial, e indujo la activación de respuestas proinflamatorias, como son la activación de la ruta NF-κB y la producción de mediadores proinflamatorios. Sin embargo, a los tiempos estudiados, CCN2(IV) no generó un aumento en los niveles de diversos factores profibróticos. Mediante abordajes farmacológicos y silenciamiento génico, demostramos que CCN2(IV), vía Nox1, causó un aumento en la producción de O2 .- en aorta de ratón, el cual dio lugar a disfunción endotelial, a un aumentó en la nitrosilación proteica y a una activación de la respuesta proinflamatoria. Finalmente, se demostró que EGFR era el receptor a través del cual CCN2(IV) ejercía sus acciones vasculares. En conjunto, estos resultados muestran que CCN2 puede actuar como una citoquina proinflamatoria y regular procesos redox mediante la activación del EGFR a nivel vascular, ampliando la visión tradicional de CCN2 y remarcando su importancia en las patologías cardiovasculares. es_ES
dc.description.abstract Connective tissue growth factor (CTGF/CCN2) is a developmental gene upregulated in pathological conditions including cardiovascular diseases. CCN2 is a gene that encodes a matricellular protein that can be degraded to biologically active fragments. Among them, the Cterminal module IV (named here CCN2(IV)) regulates many cellular functions. Traditionally, CCN2 has been considered as profibrotic mediator of several factors, including TGF-β, Ang II, or ET-1. Recently, emerging data suggest that CCN2 could participate in the regulation of the inflammatory response. CCN2 overexpression has been found in many cardiovascular diseases, including atherosclerosis and cardiac fibrosis. Among the molecular mechanisms and intracellular signalling systems involved in the pathogenesis of cardiovascular diseases, inflammation, reactive oxygen species (ROS) production and fibrosis have special relevance. The first aim was to determine whether in cardiovascular pathological conditions there was an association between CCN2 levels and ROS production, using a model of systemic infusion of Ang II into mice. In Ang II-treated mice aorta increased ROS production was found mainly located in areas of CCN2 overexpression. Therefore, we evaluated the hypothesis that CCN2 could directly regulate redox processes at the vascular level. The main aim of this thesis was to investigate whether CCN2(IV) could directly increase ROS production, by performing experiments in cultured murine vascular smooth muscle cells (VSMCs), endothelial cells (EC), and in mice aorta ex vivo and in vivo. The second aim was to investigate whether CCN2(IV) could regulate vascular functions, as well as inflammatory and fibrotic processes. In cultured vascular cells and in mice aorta CCN2(IV) increased O2 .- production and NAD(P)H oxidase activity. CCN2(IV) also induced an inflammatory response, characterized by endothelial dysfunction, increased protein nitrosylation, activation of the NF-B transcription factor and upregulation of proinflammatory markers (cytokines, adhesion molecules and chemokines). However, CCN2(IV) did not modulate profibrotic factors, at least at the time point evaluated. By pharmacological and gene silencing approaches we found that CCN2(IV), vía Nox1, increased O2 .- production in murine aorta, linked to endothelial dysfunction, increased protein nitrosylation and the upregulation of proinflammatory factors. Finally, we demonstrated that CCN2(IV) by activation of EGFR pathway, induced vascular inflammation by a mechanism mediated by NAD(P)H oxidase activation and O2 .-production. Thus, these findings expand the current view of CCN2 and remark its important role in inflammatory cardiovascular diseases. en_US
dc.format.extent 114 pags. es_ES
dc.format.mimetype application/pdf en
dc.language.iso spa en
dc.subject.other Tejido conjuntivo - Tesis doctorales es_ES
dc.title El factor de crecimiento de tejido conectivo: Modulador redox y citoquina proinflamatoria implicada en la génesis del daño vascular es_ES
dc.type doctoralThesis en
dc.subject.eciencia Medicina es_ES
dc.rights.cc Reconocimiento – NoComercial – SinObraDerivada es_ES
dc.rights.accessRights openAccess en
dc.authorUAM Rodrigues Díez, Raúl (264172)


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