Análisis de los mecanismos de diferenciación y caracterización funcional de precursores y células dendríticas en aves

Abstract

En este trabajo se han investigado las propiedades de células dendríticas y de sus progenitores empleando el sistema v-ReiER, que permite la expansión de progenitores de médula ósea de pollo transformados por el oncogen inducible v-RelER. Una vez inactivado v-RelER experimentalmente, los progenitores se diferencian en células dendríticas. En progenitores v-relER hemos identificado tirosina quinasas de membrana (IGFR, Met, Flt-4) y citoplasmáticas (FAK o Csk) y hemos demostrado que IGFR es importante para la proliferación celular. Asimismo hemos investigado algunos mecanismos de captura de antígeno empleados por las células v-relER (fagocitosis, pinocitosis o vía receptores específicos) y hemos observado una relocalizaci6n de moléculas de MHC de clase 11 que acompaña a la diferenciación de progenitores en DC. La alta motilidad de las v-relER DC ha sido otro de los aspectos estudiados en profundidad en este trabajo. Hemos identificado componentes de los complejos de adhesión foca1 expresados en células v-reiER y hemos descrito una marcada polarización de proteínas del citoesqueleto y componentes de los complejos de adhesión que va ligada a la inducción de motilidad en v-relER DC. Esta polarización también se observó en DC humanas. La caracterización de marcadores de superficie y el análisis de expresión de genes importantes en la determinación de células hematopoyéticas, indican que las vrelER DC pertenecen al linaje linfoide y no al mieloide. Finalmente se determinó que los progenitores v-relER no se diferencian a otros tipos celulares lo que indica que v-relER transforma a un precursor determinado a DC linfoides.

In this work we have investigated functional properties of avian dendritic cells (DC) and their progenitors using the v-relER system. This system allows expansion of chicken bone marrow progenitors transformed by the inducible oncoprotein v-RelER. Once v-RelER is experimentally inactivated, progenitors differentiate into DC. We have identified several tyrosine kinases, both receptor (IGFR, c-Met, Flt-4) and cytoplasmic (FAK or Csk) in v-relER progenitors, and we have shown that IGFR is important for cell proliferation. We have also analyzed mechanisms of antigen capture by v-relER cells (phagocytosis, pinocytosis or through specific receptors) and we have obsewed a relocalization of MHC class 11 molecules concomitant to the induction of differentiation of v-relER progenitors into DC. The high motility of v-relER DC was also studied in this Thesis work. We identified components of focal adhesion complexes in v-relER cells and described a marked polarization of cytoskeletai proteins and proteins of the focal adhesion complexes, associated with the high motility of DC. This polarization was also obsewed in human DC. The surface marker phenotype and the analysis of expression of genes involved in comrnitment of hematopoietic cells, indicate that v-relER DC belong to the lymphoid type of DC, and not to the myeloid DC. Finally, we determined that vrelER progenitors do not differentiate along other cell lineages, suggesting that v-relER transforms a committed precursor of lymphoid DC.