Análisis de la respuesta de células Th-CD4+ en hígado y sangre periférica de pacientes con infección crónica por el virus C de la hepatitis y su relación con el daño hepático

Abstract

A pesar de los avances realizados desde el descubrimiento del virus C de la hepatitis (VCH) aún no se conocen son los mecanismos patogénicos de la infección por VCH. Es factible que el dmo hepático asociado a la infección crónica por VCH pueda estar mediado por la acción que el sistema inmune desarrolla frente al virus. Aunque el VCH sea principalmente un virus hepatotropo, la inmunobiología de la infección se ha estudiado mayoritariamente en sangre periMrica, sin que los resultados se correlacionasen con los obtenidos por otros autores en hlgado. Por este motivo, en esta Tesis se han comparado las características Wológicas, histológicas e inmunológicas de sujetos con infección crónica por virus C que presentaban diferentes perfiies bioquímicos de la enfermedad. Además, la respuesta de células T se ha comparado en el hígado, esto es, en el sitio primario de infección por VCH, y en sangre pedérica para conocer qué relación existe entre la respuesta inmunológica y el curso asintomático o más agresivo de la enfermedad. Ya que el examen histológico realizado en esta tesis no mostró una relación entre el dafio hepático y el genotipo o la carga viica encontrada en el suero o el hígado de pacientes con infección crónica por el Wus C, se analizaron las subpoblaciones de células mononucleares de sangre penférica (CMSP) y del idtrado infíamatorio intrahepático (LIH) de estos pacientes. Este adbis demostró que pacientes con niveles elevados de ALT y mayor grado de daao hepáíico tenían un aumento signilkativo en el porcentaje de Linfocitos T cooperadores (Th)-CD4+, pero no así en el porcentaje de células T CD8+. Además, se encontró un incremento en paralelo en& el porcentaje de Illifocitos Th€D4+ y los valores de ALT o el grado de actividad necroinflamatoria hepática de estos pacientes. Este mismo anáüsis realizado en CMCP no reveló diferencias significativas. La caracterización fenotípica de maduración, diferenciación y activación demostró que la población de iinfocitos ThCD4' intrahepáticos de pacientes con infección crónica por virus C eran mayoritariamente de memoria central (8,1%-322%; CD45RO+Cü27+) o efectora (67,7%4,¿3%; CD45RO+CD27-), encontrándose un aumento significativo en el porcentaje de células ThCD4+ de memoria ektora activados (HLA-DR+) en aquellos pacientes con niveles persistentemente elevados de ALT y un mayor grado de lesión hepática. Estos resultados sugieren que el dafto hepático puede estar relacionado con la proporción de células ThCD4' efectoras del infiltrado iníiamatorio intrahepático. El análisis de la respuesta proliferativa en CMSP y Liii demostró una baja frecuencia en la respuesta de linfocitos Th-CD4+ VCH específicos restringidos por HLA de clase 11. Aunque en esta tesis se encontró una mayor frecuencia de respuestas frente a la proteha NS3 en ambos compartimientos també6n se encontraron respuestas frente a otras proteínas, confirmando la idea de la existencia de una respuesta multiespecífica. Por otro lado, el estudio de la producción de citoquinas en CMSP de pacientes VCH crónicos mostró un perfil mixto de secreción Thl/Th2 (ThO) en respuesta a proteínas del VCH. Sin embargo, en LM se encontró un aumento significativo en la frecuencia de secreción de iFN-y tanto VCHepecífica como NSkspecífica, en pacientes con niveles elevados de ALT comparado con aquellos con niveles normales. Estos resultados sugieren que las diferentes manifestaciones tanto chicas como histol6gicas de la enlemedad hepática de pacientes crónicamente infectados por VCH están relacionadas con una respuesta de linfocitos Thl€D4+V CH~specíficosr estringidos por HLA de clase Ii. En la segunda parte de esta Tesis Doctoral se estudió el perfil de expresión de ARNm de citoquinas y quimioquinas en CMSP y tejido hepático de pacientes con infección crónica por virus C. Mientras que en CMSP no se obsewaron diferencias significativas entre los pacientes, en tejido hepático se encontró la expresión simultánea de interferón 0-y y de la proteína inducida por interferón @')-lo sólo en pacientes con hepatitis C crónica. Además, se observó en estos pacientes una tendencia paralela entre la expresión de IP-10 y el grado de lesión hepática junto con una correlación entre los Nveles de expresión de IP-10 y el porcentaje de linfocitos Th€D4+ intrahepáticos. Simultáneamente, se encontró en estos pacientes la co-expresión del ARNm de la proteína quimiotáctica de monocitos/macrófagos (M-1 e interleuquina (1L)-10. Estos resultados sugieren que la expresión en el hígado de IP-lO/IFN-y contribuye decisivamente al dafio hepático encontrado en estos pacientes, a travks del mantenimiento de una respuesta Thl. Además, la co-expresión de M e - l / i L 10 podría contribuir a la persistencia del virus. En conjunto, los resultados de esta tesis muestran la implicación de la respuesta inmunológica antivúica del enfermo en el daito hepático asociado a la infección crónica por el virus C de la hepatitis.