La fosfofructokinasa-C de tumor ascítico de Ehrlich: estructura, expresión y manipulación genética
Author
Sánchez Martínez, CristinaAdvisor
Aragón Reyes, Juan JoséEntity
UAM. Departamento de Biología Molecular; UAM. Departamento de BioquímicaDate
1999-01-15Subjects
Tumor ascítico de Ehrlich - Tesis doctorales; Biología y Biomedicina / BiologíaNote
Tesis doctoral inédita leída en la Universidad Autónoma de Madrid, Facultad de Medicina, Departamento de Bioquímica y Biología Molecular. Fecha de lectura: 15-01-1999Abstract
Se ha examinado la composición de subunidades e isozimas de la
fosfofructokinasa (PFK) en células de tumor ascítico y glándula mamaria
murina, el tejido de donde procede el tumor. La PFK tumoral contiene
:roc!cmjnan!em+nte s~~hiinidadeCs. siendo las L más abundantes en
glándula mamaria, detectándose en ambos tipos de células una variante de
la subunidad M de menor movilidad electroforética. Hemos aislado la
secuencia codificante completa de la PFK-C tumoral que corresponde a una
proteína de 784 aminoácidos y 85,5 kDa, en la que están conservados los
residuos propuestos para la unión de substratos y efectores alostéricos y cuya
expresión se mantiene constante a lo largo del crecimiento del tumor en
ratones, disminuyendo cuando cesa la proliferación celular. Este enzima ha
sido sobreexpresado en levadura habiéndose caracterizado como un
tetrámero estable, cuyas propiedades reguladoras indican que la subunidad
C es mayoritariamente responsable de la ausencia de activación por fructosa-
1 ,6-P2 y la inhibición por P-enolpiruvato, peculiares de la actividad PFK
global en células tumorales. Finalmente, la construcción de PFKs quiméricas
portando la mitad N-terminal de la PFK-C tumoral y la C-terminal de la PFK-M
de músculo humano y viceversa, ha permitido analizar la contribución
funcional de cada dominio a la catálisis y el control alostérico, con especial
interés en las características diferenciales de estas PFKs.
Phosphofructokinase (PFK) subunits and isozymes have been examined in
ascites tumor cells and murine mammary gland, its original tissue. Tumor PFK
was found to contain predominantly the C-type subunit, whereas the L-type
was more abundant in mammary gland. A variant of the M-type subunit of
lower electrophoretic mobility was detected in both cell types. We have
isolated the entire coding sequence of tumor PFK-C, which corresponds to a
protein of 784 amino acids and 85,5 kDa. Residues assigned to binding sites
for substrates and effectors are conserved in this protein, which expression
was constant along tumor growth in mice and decreased when cell
proliferation stopped. The enzyme has been overexpressed in yeast as an
stable tetramer, which regulatory properties indicate that the C-type subunit is
mostly responsible for the lack of fructose-1,6-P2 activation and Penolpyruvate
inhibition that are characteristics of the whole PFK activity in
tumor cells. Finally, construction of chimeric PFKs composed of the N-terminal
half of tumor PFK-C and the C-terminal half of human muscle PFK-M, and vice
versa, led to analyze the functional contribution of each domain to catalysis
and allosteric control, specially regarding the differential characteristics of
these PFKs
Files in this item
Google Scholar:Sánchez Martínez, Cristina
This item appears in the following Collection(s)
Related items
Showing items related by title, author, creator and subject.
-
Efecto del amonio sobre la glucólisis aerobia en células de tumor ascítico de Ehrlich
Sánchez Olavarría, Jesús María
1979-05-21 -
Bases enzimáticas de la glicolisis aerobia en tumores: estudio de las enzimas clave en el tumor ascítico de Ehrlich
Lazo Taracena, Pedro Alfonso
1980 -
Interacción entre el metabolismo de aminoácidos y el consumo de glucosa en células de tumor ascítico de Ehrlich
González Mateos, Fernando
1993