La fosfofructokinasa-C de tumor ascítico de Ehrlich: estructura, expresión y manipulación genética

Biblos-e Archivo/Manakin Repository

Show simple item record

dc.contributor.advisor Aragón Reyes, Juan José (dir.)
dc.contributor.author Sánchez Martínez, Cristina
dc.contributor.other UAM. Departamento de Biología Molecular es_ES
dc.contributor.other UAM. Departamento de Bioquímica es_ES
dc.date.accessioned 2016-10-03T10:19:45Z
dc.date.available 2016-10-03T10:19:45Z
dc.date.issued 1999-01-15
dc.identifier.uri http://hdl.handle.net/10486/673843
dc.description Tesis doctoral inédita leída en la Universidad Autónoma de Madrid, Facultad de Medicina, Departamento de Bioquímica y Biología Molecular. Fecha de lectura: 15-01-1999 es_ES
dc.description.abstract Se ha examinado la composición de subunidades e isozimas de la fosfofructokinasa (PFK) en células de tumor ascítico y glándula mamaria murina, el tejido de donde procede el tumor. La PFK tumoral contiene :roc!cmjnan!em+nte s~~hiinidadeCs. siendo las L más abundantes en glándula mamaria, detectándose en ambos tipos de células una variante de la subunidad M de menor movilidad electroforética. Hemos aislado la secuencia codificante completa de la PFK-C tumoral que corresponde a una proteína de 784 aminoácidos y 85,5 kDa, en la que están conservados los residuos propuestos para la unión de substratos y efectores alostéricos y cuya expresión se mantiene constante a lo largo del crecimiento del tumor en ratones, disminuyendo cuando cesa la proliferación celular. Este enzima ha sido sobreexpresado en levadura habiéndose caracterizado como un tetrámero estable, cuyas propiedades reguladoras indican que la subunidad C es mayoritariamente responsable de la ausencia de activación por fructosa- 1 ,6-P2 y la inhibición por P-enolpiruvato, peculiares de la actividad PFK global en células tumorales. Finalmente, la construcción de PFKs quiméricas portando la mitad N-terminal de la PFK-C tumoral y la C-terminal de la PFK-M de músculo humano y viceversa, ha permitido analizar la contribución funcional de cada dominio a la catálisis y el control alostérico, con especial interés en las características diferenciales de estas PFKs. Phosphofructokinase (PFK) subunits and isozymes have been examined in ascites tumor cells and murine mammary gland, its original tissue. Tumor PFK was found to contain predominantly the C-type subunit, whereas the L-type was more abundant in mammary gland. A variant of the M-type subunit of lower electrophoretic mobility was detected in both cell types. We have isolated the entire coding sequence of tumor PFK-C, which corresponds to a protein of 784 amino acids and 85,5 kDa. Residues assigned to binding sites for substrates and effectors are conserved in this protein, which expression was constant along tumor growth in mice and decreased when cell proliferation stopped. The enzyme has been overexpressed in yeast as an stable tetramer, which regulatory properties indicate that the C-type subunit is mostly responsible for the lack of fructose-1,6-P2 activation and Penolpyruvate inhibition that are characteristics of the whole PFK activity in tumor cells. Finally, construction of chimeric PFKs composed of the N-terminal half of tumor PFK-C and the C-terminal half of human muscle PFK-M, and vice versa, led to analyze the functional contribution of each domain to catalysis and allosteric control, specially regarding the differential characteristics of these PFKs es_ES
dc.format.extent 123 pag. es_ES
dc.format.mimetype application/pdf en
dc.language.iso spa en
dc.subject.other Tumor ascítico de Ehrlich - Tesis doctorales es_ES
dc.title La fosfofructokinasa-C de tumor ascítico de Ehrlich: estructura, expresión y manipulación genética es_ES
dc.type doctoralThesis en
dc.subject.eciencia Biología y Biomedicina / Biología es_ES
dc.rights.accessRights closedAccess en


Files in this item

Thumbnail

This item appears in the following Collection(s)

Show simple item record