Síntesis in vitro del RNA genómico del virus de la gripe|basociación a la matriz molecular

Abstract

Se ha seguido un esquema de fraccionamiento celular para el estudio y la caracterización de la actividad polimerasa del virus de la gripe en distintos compartimentos celulares. Todas las fracciones celulares estudiadas, definidas operacionaimente por las condiciones de extracción. presentan actividad polimerasa viral. Esta actividad se desplaza desde el núcleo hasta las fracciones citoplásmicas con el transcurso de la infección. Para la caracterización del RNA sintetizado in vitro en cada fracción se ha diseñado un método de hibridación en líquido del RNA con sondas monocatenarias de DNA. Este método permite la detección de ambas polaridades del RNA del virus y la correcta selección de un RNA del segmento 8 de polaridad definida para su análisis bioquímico. Todas las fracciones celulares estudiadas sintetizan RNA vira1 de polaridad positiva, sin embargo sólo la actividad enzimática asociada a la matriz nuclear es capaz de sintetizar RNA genómico del virus. Este RNA genómico sintetizado in vitro se ha caracterizado exhaustivamente por análisis de tamaño. ensayo de protección a RNAsas y distribución de oligonucleótidos resistentes a ribonucleasa TI.