Secuenciación masiva (NGS): Desarrollo, validación y aplicabilidad en el diagnóstico genético preimplantacional (DGP)

Abstract

El Test Genético Preimplantacional (TGP) es el estudio de la información genética de un embrión obtenido mediante técnicas de reproducción asistida, fecundación in vitro con inyección intracitoplasmática y biopsia embrionaria, para seleccionar aquellos embriones cromosómicamente normales o libres de desórdenes genéticos heredados antes de la transferencia al útero materno. Está englobado dentro de la medicina preventiva y es un método de diagnóstico que surge gracias a los avances en las técnicas de reproducción asistida como la biopsia embrionaria en estadio temprano de división (blastómero) o en estadio de blastocisto (trofoectodermo). Sobre esas muestras se pueden aplicar técnicas de análisis cromosómico y molecular para poner de manifiesto posibles alteraciones genéticas y cromosómicas en el embrión y con anterioridad a su posible implantación. El objeto fundamental de esta tesis doctoral ha sido validar un protocolo de Secuenciación Masiva (NGS) aplicado al TGP de “screening” de aneuploidías (TGP-A) y alteraciones cromosómicas estructurales (TGP-SR) para el análisis de blastómeros y trofoectodermo. Además, se ha desarrollo de un protocolo de análisis estandarizado mediante Reacción en Cadena de la Polimerasa para TGP para su aplicación a distintas enfermedades monogénicas (TGP-M) y para los casos de análisis de enfermedad monogénica y complemento cromosómico (COMB-TGP). Los resultados obtenidos confirman que la secuenciación masiva es una técnica robusta, de alto rendimiento y lista para su aplicación clínica en el campo de la genética reproductiva. Permite detectar con altísima fiabilidad tanto aneuploidías, desequilibrios cromosómicos como mosaicismo. El protocolo desarrollado para el TGP-M permite identificar en un embrión cualquier enfermedad monogénica cuyo gen esté identificado y además analizar su complemento cromosómico.